ნუკლეინის მჟავას სინთეზი ხორციელდება მყარი ფაზის სიალიკის ამიდის ტრიგლიცერიდის მეთოდის გამოყენებით, რომლის დროსაც დნმ-ის 3' ბოლო იმობილირდება მყარი ფაზის სუბსტრატზე და ნუკლეოტიდები ემატება 3'-დან 5'-მდე მიმართულებით, სანამ სასურველი დნმ-ის ფრაგმენტი არ სინთეზდება. .ეს განსხვავდება დნმ-ის სინთეზისგან დნმ პოლიმერაზას გამოყენებით.
The 3′ end of the first base is immobilised on CPG during synthesis, the 5′-OH of the next base is protected with di-p-tolyl trityl DMT, the amino group on the base is protected with benzoic acid and the 3′ -OH შემდეგ აქტიურდება ამინოფოსფატის ნაერთთან ერთად.
ოლიგოს სინთეზის საფეხურები
ბლოკირება
The5 ბოლო DMT დამცავი ჯგუფი ამოღებულია TCA ხსნარის დამატებით.
გააქტიურება
აქტივატორის შერევა ოლიგონუკლეოტიდულ მონომერთან აქტიური ოლიგონუკლეოტიდური მონომერის შუალედური წარმოქმნით.
დაწყვილება
5-ტერმინალური ჰიდროქსილის ჯგუფი რეაგირებს აქტიურ ოლიგონუკლეოტიდურ შუალედთან ანტი-გენერაციული კონდენსაციის რეაქციაში და ქმნის არასტაბილურ ფოსფიტ ტრიგლიცერიდულ კავშირს.
დაფარვა
დაფარვის აგენტის დამატება ახორციელებს აცეტილირების დაფარვის რეაქციას ჭარბი ჰიდროქსილის ჯგუფებით, რომლებიც არ მონაწილეობენ კონდენსაციის რეაქციაში.
ოქსიდაცია
წყლის შემცველი იოდის ხსნარის დამატება რეაგირებს არასტაბილურ ფოსფიტურ ბმებთან დაჟანგვის გზით და წარმოქმნის სტაბილურ ფოსფორმჟავას ტრიგლიცერიდულ ბმებს.
ციანოეთილის გაყოფა
ნუკლეინის მჟავის პროდუქტი სინთეზის შემდეგ, DEA ხსნარის დამატებით, რათა ამოიღონ ციანოეთილის ჯგუფი ფოსფატის ტრიგლიცერიდული ბმადან.
Cleaved&Deprotection
ნუკლეინის მჟავას ფრაგმენტები იშლება მყარი ფაზის მატარებლიდან კონცენტრირებული ამონიუმის ჰიდროქსიდის ხსნარის დამატებით და შემდეგ თბება დამცავი ჯგუფების ამოღების მიზნით ფუძის წყალბადის ბმებიდან.
გამოქვეყნების დრო: ნოე-21-2022